《生活飲用水標準檢驗方法》：產氣莢膜梭狀芽孢桿菌整體解決方案

2023年3月17日經國家市場監督管理總局（國家標準化管理委員會）批準發布GB/T 5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》系列標準，代替實施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活飲用水標準檢驗方法》。

新標準將于2023年10月1日起正式實施。 GB/T 5750-2023標準歷時5年，經過了3輪意見征求，有280+單位參與研制與驗證，有超過500名行業專家參與的GB/T 5750修訂工作，最終大功告成。

本次修訂微生物指標主要內容：新增腸球菌和產氣莢膜梭狀芽孢桿菌兩個檢測指標、3種檢測方法和增加菌落總數酶底物法新方法。

其中產氣莢膜梭狀芽孢桿菌是新增檢測指標，有些老師不清楚檢測過程中需要用到哪些設備，我們根據標準的要求做個簡單介紹。

根據標準要求我們需要準備以下儀器和耗材：

1.  電子天平：實驗室常用儀器

2.  pH計或精密pH試紙：實驗室常用儀器或耗材

3.  恒溫培養箱：實驗室常用儀器

4.  冰箱：實驗室常用儀器

5.  恒溫水浴箱：實驗室常用儀器

6.  顯微鏡：實驗室常用儀器

7.  無菌吸管：實驗室常用耗材或儀器

8.  無菌試管：實驗室常用耗材

9.  無菌平皿：實驗室常用耗材

10. 厭氧培養裝置：華端生物HD-AN系列智能厭氧微需氧培養系統

11. 過濾設備：華端生物HD-F系列水中微生物膜過濾裝置

12. 濾膜:實驗室常用耗材

13. 無齒鑷子：實驗室常用耗材

其他會用到的設備：HD-C系列菌落計數儀、HD-DT系列自動樣品稀釋儀、HD-GM系列全自動革蘭氏染色儀、HD-S系列自動培養基分裝儀、HD-MA系列自動微生物生化鑒定系統

產氣莢膜梭狀芽孢桿菌檢測流程圖

一、 樣品

1. 污染較輕的水樣，可直接取100 ml水樣進行檢驗。

2. 污染嚴重的水樣，可使用0.1%緩沖蛋白胨水將水樣按10倍系列稀釋，取100ml進行檢驗。

使用華端生物HD-DT系列自動樣品稀釋儀：自動稱重，自動按比例稀釋。

二、 過濾水樣

先用無菌鑷子夾取無菌濾膜邊緣部分，將濾膜正面朝上貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，將100 ml水樣注入濾器中，打開濾器閥門，在-5.07X104Pa(-0.5 個大氣壓)下抽濾。每次試驗均需要用100 mL0.1%緩沖蛋白胨水講行空白對照。

使用華端生物HD-F系列水中微生物膜過濾裝置：配備直排泵，無需廢液瓶，直排廢液；火焰滅菌支架和濾杯，提高實驗效率。

三、厭氧培養

過濾完水樣后，關上濾器閥門，取下濾器，用無菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移濾膜倒置在SPS瓊脂培養基上，濾膜截留細菌面與培養基貼緊，避免氣泡產生，然后將平皿倒置于厭氧培養裝置內，于36℃±1℃厭氧培養18 h~ h，計數黑色菌落數。

使用華端生物HD-AN系列智能厭氧微需氧培養系統：使用靈活、成本低，培養效果有保障，操作簡單、智能。

四、 菌落計數

對濾膜上證實為產氣莢膜梭狀芽孢桿菌的菌落進行計數

使用華端生物HD-C系列菌落計數儀：手動菌落計數器輔助計數，操作方便；全自動菌落計數儀：軟件自動計數，計數快捷、準確。

五、 細菌鑒定

用上述培養液涂片，革蘭氏染色、鏡檢。產氣莢膜梭狀芽孢桿菌為革蘭陽性粗大桿菌，其耐熱菌株可能形成卵形芽抱,位于菌體中央或近端，其寬度一般不超過菌體寬度。

使用華端生物HD-GM系列全自動革蘭氏染色儀：自動化的染色儀使革蘭氏染色實驗自動化、標準化，批量大時可節約大量時間。

使用華端生物HD-MA系列自動微生物生化鑒定系統：標準化的試劑操作，儀器自動判讀結果，避免人工判讀偏差。

六、 其他儀器

使用華端生物HD-S系列自動培養基分裝儀：自動分裝培養基或者其他微生物試劑，方便、快速。

使用華端生物HD-M系列微生物質譜快速鑒定儀：相比傳統鑒定方式更快出結果、準確性更高、操作更簡單、檢測范圍更廣。

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